茎尖组织培养脱毒种薯

（1）脱毒材料选择

茎尖组织培养的目的是脱掉病毒，而脱毒效果与材料的选择关系很大。实践证明，同一品种个体之间在产量上或病毒感染程度上都有很大的差异。进行组织培养之前，应于生育期选择具有该品种典型性状、生长健壮的单株，结合产量情况和病毒检测，选择高产、病少的单株作为茎尖脱毒的基础材料，以提高脱毒效果。

（2）茎尖组织培养过程

第一步：取材和消毒。剥取茎尖可用植株分枝或腋芽，但大多采用块茎发出的嫩芽。经过催芽处理的块茎在温室内播种，待幼芽长至4～5cm，幼叶未展开时，剪取上段2cm长的茎尖，剥去外面叶片，放入烧杯，用纱布封口，在自来水下冲洗30min，然后在超净工作台上进行严格的消毒。消毒方法是先用75%酒精浸15s，无菌水洗2次；再用5%次氯酸钙浸泡15～20min，然后用无菌水冲洗3～5次，放在灭过菌的培养皿中待用。

第二步：茎尖剥离和接种。在超净工作台上，将消毒好的芽置于340倍解剖镜下，用解剖针小心地剥除顶芽的小叶片，直到露出光滑的生长锥后，用解剖针切取0.1～0.3mm带1～2个叶原基的茎尖生长点，迅速接种到预先做好的培养基上。培养基一般采用MS配方，同时添加不同浓度的植物激素，接种前要经过高压灭菌。茎尖剥离和接种所用一切器具均应进行严格的消毒。

第三步：茎尖培养。把生长点放入培养基后应置于培养室内，培养温度20℃～25℃，光照强度2000～3000勒克斯，光照时间16小时/天。条件适宜的情况下，30～40天后即可看到伸长的小茎，叶原基形成可见的小叶，此时及时将其转入无生长调节剂的培养基中。2—3个月后即能发育成3～4个叶片的小苗。待小苗长到4～5节时，即可单节切段进行快繁，以备病毒检测。